Tipos de columnas en HPLC

La Cromatografía Líquida de Alta Resolución, comúnmente conocida como HPLC, es una técnica analítica utilizada en numerosos campos como la química, petroquímica, farmacéutica, alimentaria y muchas más. En esta técnica de separación, se emplean diferentes tipos de columnas, las cuales son la clave principal del proceso.

Si estás interesado en conocer más acerca de las columnas utilizadas en la HPLC, has venido al lugar correcto. En este artículo de “TiposDe”, te presentamos todo lo que necesitas saber sobre los diferentes tipos de columnas empleados en la HPLC

Antes de adentrarnos en los diferentes tipos de columnas, es importante destacar que la elección de la columna adecuada dependerá directamente de la muestra que deseas analizar, así como de los objetivos específicos que tengas previamente establecidos

Tipo de columnas en HPLC

1. Columnas de Fase Reversa (RP)

   Las columnas RP son las más utilizadas y eficaces para separar una amplia variedad de compuestos hidrófobos y polares. Las columnas RP están diseñadas con una capa de material hidrófobo (C18, C8, C4, entre otros), la cual interactúa de forma selectiva con los analitos polares y apolares presentes en la muestra.

2. Columnas de Fase Normal (NP)

   Las columnas NP son empleadas para separar compuestos hidrófilos y menos polares. A diferencia de las columnas RP, estas columnas contienen una capa hidrófila, como por ejemplo la sílica.

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3. Columnas de Intercambio Iónico (IC)

   Las columnas IC son utilizadas para separar iones en la muestra y se dividen en dos tipos: las columnas de intercambio iónico aniónico (AIC) que retienen cationes en la columna, y las columnas de intercambio iónico catiónico (CIC) que retienen aniones en la columna.

4. Columnas de Exclusión (SEC)

   Las columnas SEC utilizan la permeabilidad de las moléculas de la muestra para separar los compuestos presentes. De esta forma, dejan pasar las moléculas más grandes, mientras que las más pequeñas son retenidas por la matriz de la columna.

5. Columnas de Afinidad (AC)

   Las columnas de afinidad se utilizan para la separación de moléculas que presentan una alta interacción con ciertos ligandos específicos para su separación. Estas columnas presentan ligandos específicos para una determinada molécula, y se utilizan para la purificación de proteínas bioquímicas como anticuerpos u hormonas.

6. Columnas de Intercambio de Tamaño (GFC)

   Las columnas GFC se utilizan para separar moléculas en función de su tamaño molecular. Las moléculas más pequeñas pasan a través de la matriz de la columna, mientras que las moléculas más grandes son retenidas en la matriz de la columna.

7. Columnas de Fase Inversa Débil (WPR)

   Las columnas de WPR se utilizan para separar compuestos de molécula pequeña a mediana con menor retención comparada a la fase reversa convencional.

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8. Columnas de Intercambio Hidrófilo (HILIC)

   Las columnas de HILIC separan analitos polares y hidrófilos mediante una separación basada en las interacciones hidrofóbicas y electrostáticas con una matriz de sílica polar.

9. Columnas Superficiales (SFC)

   Las columnas SFC son un tipo especializado de columna que se utiliza en cromatografía de flujo supercrítico. La separación se produce en una corriente de gas comprimido que actúa como disolvente.

10. Columnas de Quiralidad (CC)

    Las columnas de CC se utilizan para separar compuestos quirales que, a diferencia de las demás columnas, tienen una superficie con un enantiómero específico covalentemente unido a dicha superficie.

Preguntas frecuentes

1. ¿Qué es la HPLC?

   La HPLC es una técnica empleada para separar, identificar y cuantificar los componentes de una muestra líquida, empleando una columna cromatográfica.

2. ¿Qué significa RP en las columnas HPLC?

   RP significa fase reversa, lo que indica que la columna está empaquetada con un material hidrófobo, que retiene analitos polares y no polares que interactúan con esta.

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3. ¿Cuánto tiempo duran las columnas HPLC?

   La vida útil de la columna HPLC depende del tipo de análisis y los componentes de la muestra empleada en la prueba. La columna RP puede durar de 300 a 500 inyecciones, mientras que las columnas de GFC y SEC tienen una vida útil mayor, ya que no requieren limpieza ni regeneración con frecuencia.

4. ¿Cómo se elige una columna HPLC adecuada?

   La elección de la columna adecuada dependerá del compuesto que se desea analizar, la matriz de la muestra y el objetivo específico que se tenga previamente establecido.

5. ¿Cuál es el tamaño de partícula recomendado para las columnas HPLC?

   El tamaño de partícula recomendado para las columnas HPLC varía según el tipo de columna y el tipo de análisis a realizar. Las partículas más pequeñas proporcionan una mayor eficiencia de separación, pero también pueden generar una mayor presión.

Conclusión

En conclusión, la elección de la columna adecuada es esencial para obtener resultados precisos y confiables en la HPLC. Cada tipo de columna posee una función específica, y es necesario comprender sus características para seleccionar la mejor columna para el proceso de análisis. Si estás comenzando con la HPLC o buscando mejorar tus resultados, la elección de la columna correcta es el primer paso necesario para un análisis exitoso.

En “TiposDe” esperamos que este artículo haya sido de utilidad para ti y te haya brindado una mejor comprensión sobre los diferentes tipos de columnas utilizados en la HPLC. ¡No dudes en compartir tus comentarios e inquietudes sobre el tema en la sección de comentarios!

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